[Lab2000.com - Forum] Informazione

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Ciao e buongiorno anche a te,
uno dei modi per verificare se l'RNA sia stato realmente estratto e quello 
di far 'correre' una piccola aliquota su gel. E' possibile utilizzare sia un 
gel di poliacrilammide (un 12% in acrilammide dovrebbe andare bene ma 
verificalo!) in abiente denaturante con urea, sia un gel di agarosio 
(diciamo 1,2% sempre da verificare). In entrambe i casi l'RNA deve essere 
denaturato a 65°C e caricato insieme ad una soluzione (load solution) 
contenete formammide, in modo da mantenere lo stato denaturato. Prima di 
maneggiare la tua soluzione di RNA accertati di utilizzare consumabili 
sterili e possibilmente trattati con DEPC per inibire possibili RNasi. Il 
passaggio successivo potrebbe essere quello del dosaggio spettrofotometrico, 
ma attenta perchè gli acidi nucleici assorbono a 260 nm, quindi potresti 
commettere errori di sovrastima. (Io ho notato che in alcune preparazioni di 
DNA, anche dopo trattamento con RNasi, l'assorbimento reale era influenzato 
di un fattore circa 10).

Ciao ed in bocca al lupo

Ernesto



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Dr Ernesto Picardi
Cell Biology Department
University of Calabria
Via Ponte Pietro Bucci
87036, Arcavacata di Rende (CS)
Italy

Tel.: +39 0984 492937
Fax: +39 0984 492911
E-mail: e.picardi at unical.it
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----- Original Message ----- 
From: <forum at lists01.stargate.net>
To: "forum" <forum at lab2000.com>
Sent: Tuesday, March 15, 2005 4:13 PM
Subject: [Lab2000.com - Forum] Informazione


> buongiorno,
> avrei bisogno di un 'informazione:
> mi sapete indicare una metodica o un protocollo da seguire per verificare 
> se l'estrazione dell'RNA (da colture cellulari) è andata a buon fine?!
> Se per il DNA (e gli amplificati) si usa il gel d'agarosio e 
> l'elettroforesi, cosa si usa per determinare se vi è stata l'astrazione 
> dell'RNA??
> Confido Molto inùa vostra risposta.
> Grazie molte.Saluti
> Dott.ssa Rossi
>
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